Ayın Biri Kilisesi, İstanbul'un Fatih ilçesindeki Vefa semtinde yer alan tarihi bir yapıdır. Kilisenin kökleri 1080’li yıllara kadar uzanıyor. İlk olarak, 1755 yılında bir Rum ailesi tarafından inşa edilmiştir. Rivayete göre, ailenin kızı Maria, rüyasında Meryem Ana'nın kendisine yerin altında bir ayazma olduğunu söylemesi üzerine, bu ayazmanın bulunduğu yerin üzerine bir kilise yapılmasına karar verilmiştir.
Kilisenin adı, her ayın birinci günü açılması nedeniyle halk arasında "Ayın Biri" olarak anılmaktadır. Bu gün, kiliseye gelen ziyaretçiler, dilek dilemek ve dualar etmek için uzun kuyruklar oluşturur. Ayın Biri Kilisesi, özellikle dileklerin gerçekleştiğine inanılmasıyla bilinir; burada ziyaretçiler, aldıkları anahtarları dileklerini simgelemek amacıyla kullanır ve bu anahtarların, istenilen şeyin kapısını açacağına inanırlar.
Kilisenin alt katında bulunan ayazma, Ortodoks Hıristiyan inancına göre şifalı su kaynağı olarak kabul edilmektedir. Buradan alınan suyun, ziyaretçilerin dileklerinin kabul olmasına yardımcı olduğuna inanılır. Ayın Biri Kilisesi, sadece Hristiyanların değil, aynı zamanda farklı dinlerden birçok ziyaretçiye ev sahipliği yaparak İstanbul'un kültürel mirasına katkı sağlamaktadır.
Ziyaretçiler için eşsiz bir deneyim sunan Ayın Biri Kilisesi, hem tarihi hem de dini bir ziyaret noktası olarak dikkat çekmektedir.